جداسازی سلول های تک هسته ای از خون محیطی

آذر, 1398 بدون نظر آموزش, رسانه, علمی پژوهشی

یکی از روش های جداسازی سلول‌های تک‌هسته‌ای خون محیطی ، استفاده از فایکول و گرادیان شیب غلظت است. بدین‌ منظور خون محیطی همراه با ضد انعقاد جمع‌آوری میشود. خون به نسب برابر با PBS رقیق شده و بر روی فایکول به‌طوری‌که به‌صورت دو لایه جدا از هم قرار بگیرند، ریخته میشود و با دور 4000 به مدت 20 دقیقه سانتریفوژ می گردد. سلول‌های تک‌هسته‌ای جدا شده با PBS شستشو داده میشود و رسوب سلولی در محیط غنی شده RPMI همراه با 10% سرم و 1% آنتی‌بیوتیک (پنی‌سیلین – استرپتومایسن) به‌صورت سوسپانسیون در می آید.
جداسازی مونوسیت‌ها از سلول‌های تک‌هسته‌ای خون محیطی: سوسپانسیون سلولی در محیط غنی شده داخل فلاسک‌های مخصوص کشت  25 ریخته شده و به مدت 3 ساعت در دمای 37 درجه همراه با 5% CO2 و رطوبت انکوبه می گردد. پس از این مدت محیط رویی درون فلاسک را که شامل سلول‌های غیر چسبنده است دور ریخته و با محیط غنی شده سلول‌های چسبیده به فلاسک را کاملاً شستشو داده تا هیچ‌گونه سلول غیر چسبیده‌ای وجود نداشته باشد. سپس با استفاده از محلول 0.02% EDTA/PBS سرد ( تریپسین) که بر روی یخ قرار دارد و انکوبه 10 دقیقه‌ای بر روی یخ و پس از آن ضربه‌های محکم به فلاسک، مونوسیت‌های چسبیده به کف فلاسک را جدا شدند.

برچسب ها

ارسال نظر شما

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

17 − 3 =